ساخت و انتقال سازه ژنی pBI:AtEXPB2 به آرابیدوپسیس تالیانا

چکیده
    رشد گیاه در نتیجه تقسیم سلولی و بزرگ شدن سلول است. اکسپنسین ها پروتئین هایی هستند که به عنوان واسطه در بسط بلند مدت دیواره های سلولی عمل می کنند. اکسپنسین ها در سلول های گیاهی نقش های متنوعی را انجام می دهند. در این پژوهش ژن AtEXPB2 در گیاه آرابیدوپسیس تالیانا تشدید بیان شد. برای این کار ابتدا ژن مذکور از ژنوم آرابیدوپسیس تکثیر و جدا گردید. سپس قطعه 1134 جفت بازی تکثیر شده در ناقل های حدواسط pGEMT و pBI121 کلون شد. انتقال ژن به روش غوطه وری گل آذین با واسطه آگروباکتریوم انجام شد.  بذور حاصل در محیط حاوی آنتی بیوتیک کانامایسین کشت داده شده و گیاهچه های سبز چهار برگی که نشانه متحمل بودن به آنتی بیوتیک کانامایسین و تراریخت بودن احتمالی گیاهان است به گلدان منتقل گردید. از واکنش زنجیره ای پلیمراز برای تایید گیاهان تراریخت استفاده شد. آنالیز RT-PCR با پرایمر های اختصاصی ژن AtEXPB2 قطعه 822 جفت بازی را تکثیر نمود که فعال بودن آن را در سیستم گیاهی آرابیدوپسیس تایید کرد. نتایج حاصله نشان داده که امکان تشدید بیان ژن های خانواده اکسپنسین برای رسیدن به گیاهان متحمل به تنش خشکی وجود دارد.